農(nóng)業(yè)部辦公廳

農(nóng)業(yè)部辦公廳關(guān)于印發(fā)《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物有效性評價試驗指南（試行）》和《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物耐受性評價試驗指南（試行）》的通知

農(nóng)辦牧[2011]21號


　　為規(guī)范飼料和飼料添加劑安全性評價和有效性試驗工作，保證試驗結(jié)果的科學(xué)性、客觀性，根據(jù)《飼料和飼料添加劑管理條例》、《新飼料和新飼料添加劑管理辦法》和《進(jìn)口飼料和飼料添加劑登記管理辦法》有關(guān)規(guī)定，我部委托全國飼料評審委員會制定了《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物有效性評價試驗指南（試行）》和《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物耐受性評價試驗指南（試行）》。現(xiàn)印發(fā)你們，請參照執(zhí)行。

　　附件：

　　1.《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物有效性評價試驗指南（試行）》

　　2.《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物耐受性評價試驗指南（試行）》


　　二〇一一年六月十七日



附件1：


飼料和飼料添加劑畜禽靶動物有效性評價試驗指南（試行）

1 適用范圍
1.1本指南規(guī)定了飼料原料和飼料添加劑畜禽靶動物有效性評價試驗的基本原則、試驗方案、試驗方法和試驗報告等要求。
1.2本指南適用于為新飼料和飼料添加劑、進(jìn)口飼料和飼料添加劑申報以及已經(jīng)批準(zhǔn)使用的飼料和飼料添加劑再評價而進(jìn)行的畜禽靶動物體內(nèi)有效性評價試驗。
1.3 畜禽飼料產(chǎn)品的靶動物體內(nèi)有效性評價試驗可參照本指南的要求進(jìn)行。
2 基本原則
2.1應(yīng)根據(jù)我國的養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)實際開展靶動物有效性評價試驗，以保證評價結(jié)果的科學(xué)性、客觀性。
2.2靶動物有效性評價試驗應(yīng)對受試物所適用的每一種靶動物分別進(jìn)行評價，本指南4.2.2以及其他另有規(guī)定的特殊情況除外。
2.3 靶動物有效性評價試驗應(yīng)由具備一定專業(yè)知識和試驗技能的專業(yè)人員在適宜的試驗場所、使用適宜的設(shè)備設(shè)施、按照規(guī)范的操作程序進(jìn)行，并且由試驗機(jī)構(gòu)指定的負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)。用于產(chǎn)品申報的，評價機(jī)構(gòu)和人員的要求另行規(guī)定。
2.4試驗動物應(yīng)健康并且具有相似的遺傳背景；飼養(yǎng)環(huán)境不應(yīng)對試驗結(jié)果造成影響；受試物和試驗日糧不得受到污染。
2.5在符合靶動物有效性評價試驗相關(guān)要求的前提下，靶動物有效性評價試驗可與靶動物耐受性試驗合并進(jìn)行。
2.6試驗應(yīng)證明受試物最低推薦用量的有效性，一般通過設(shè)定負(fù)對照和選擇敏感靶指標(biāo)進(jìn)行。必要時設(shè)正對照。
2.7當(dāng)有效性評價試驗的目的是證明受試物能為靶動物提供營養(yǎng)素時，應(yīng)設(shè)置一個該營養(yǎng)素水平低于動物需求、但又不至嚴(yán)重缺乏的對照日糧。
2.8 應(yīng)采用梯度劑量設(shè)計，為推薦用量或用量范圍的確定提供依據(jù)。
有效性評價試驗的梯度水平不得少于3個；但作為產(chǎn)品申報的，奶牛試驗的梯度水平不得少于4個，其他動物不得少于5個。
2.9 由于試驗條件和受試物特性的限制，可以進(jìn)行多個有效性評價試驗以證明受試物的有效性。當(dāng)試驗次數(shù)超過3次時，建議采用整合分析法（meta-analysis）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，但每次試驗應(yīng)采用相似的設(shè)計，以保證試驗數(shù)據(jù)的可比性。
3 試驗方案
試驗開始前，應(yīng)根據(jù)受試物和靶動物的特點，對試驗進(jìn)行系統(tǒng)設(shè)計，形成試驗方案。試驗方案應(yīng)包括試驗?zāi)康摹⒃囼灧椒ā�儀器設(shè)備、詳細(xì)的動物品種和類別、動物數(shù)量、飼養(yǎng)和飼喂條件等，并由試驗負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。具體要求如下：
3.1試驗動物：品種、年齡、性別、生理階段和一般健康狀況；
3.2試驗條件：動物來源和種群規(guī)模、飼養(yǎng)條件、飼喂方式；預(yù)飼期的條件要求；
3.3試驗分組：試驗組和對照組數(shù)量、每組重復(fù)數(shù)和每個重復(fù)的動物數(shù)（必須滿足統(tǒng)計學(xué)要求）、統(tǒng)計方法；
3.4試驗日糧：描述日糧的加工方法、日糧組成及相關(guān)的營養(yǎng)成分含量（實測值）和能量水平；注意根據(jù)受試物特點和使用方法配制日糧，使用的原料應(yīng)符合我國法規(guī)和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，各試驗處理組試驗因子以外的其他因素（如：料型、粒度、加工工藝等）應(yīng)一致；
3.5受試物的測定：受試物及其有效成分的通用名稱、生產(chǎn)廠家、規(guī)格、生產(chǎn)批號、有效成分含量的測試方法及測試結(jié)果、測試機(jī)構(gòu)，受試物有效成分在試驗日糧中的含量；
3.6觀測項目和時間：檢測和觀察項目名稱、實施和持續(xù)的確切時間；
3.7疾病治療和預(yù)防措施：不應(yīng)干擾受試物的作用模式并逐一記錄；
3.8突發(fā)狀況處理：動物個體和各試驗組發(fā)生的所有非預(yù)期的突發(fā)狀況，都應(yīng)記錄其發(fā)生的時間和范圍。
4、試驗方法
4.1受試物
4.1.1對于申請產(chǎn)品審定或登記的受試物，應(yīng)與擬上市（或擬進(jìn)口）的產(chǎn)品完全一致。產(chǎn)品應(yīng)由申報單位自行研制并在中試車間或生產(chǎn)線生產(chǎn)，同時提供產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和使用說明。
4.1.2試驗機(jī)構(gòu)應(yīng)將受試物樣品送國家或農(nóng)業(yè)部認(rèn)可的質(zhì)檢機(jī)構(gòu)對其有效成分的含量進(jìn)行實際測定。
4.2 有效性評價試驗的基本類型
受試物的靶動物有效性評價試驗一般分為長期有效性評價試驗和短期有效性評價試驗。消化率或氮、磷減排等指征明確的指標(biāo)可通過短期有效性評價試驗進(jìn)行測定，生長性能、飼料轉(zhuǎn)化效率、產(chǎn)奶量、產(chǎn)蛋性能、胴體組成和繁殖性能等一般性指標(biāo)必須通過長期有效性評價試驗進(jìn)行測定。
4.2.1 短期有效性評價試驗
4.2.1.1生物有效性、生物等效性、消化和平衡試驗均屬于短期有效性評價試驗。必要時，也可進(jìn)行其他短期有效性評價試驗。短期有效性評價試驗應(yīng)遵循公認(rèn)的方法進(jìn)行。
4.2.1.2 生物有效性是指活性物質(zhì)或代謝產(chǎn)物被吸收、轉(zhuǎn)運到靶細(xì)胞或靶組織并表現(xiàn)出的典型功能或效應(yīng)。生物有效性應(yīng)通過可觀察或可測量的生物、化學(xué)或功能性特異指標(biāo)進(jìn)行評價。
4.2.1.3 生物等效性試驗用于評價可能在靶動物體內(nèi)具有相同生物學(xué)作用的兩種受試物。如果兩種受試物所有相關(guān)效果均相同，則可認(rèn)為具有生物等效性。
4.2.1.4 消化試驗可用于評價受試物對靶動物體內(nèi)某種營養(yǎng)素消化率（如表觀消化率、真消化率、回腸消化率）的影響。
4.2.1.5 平衡試驗還可獲得營養(yǎng)素在靶動物體內(nèi)沉積和排出數(shù)量等額外數(shù)據(jù)。
4.2.2 長期有效性評價試驗
4.2.2.1 應(yīng)針對受試物適用的靶動物，按照規(guī)定的試驗期、試驗重復(fù)數(shù)和動物數(shù)量的要求開展長期有效性評價試驗。具體要求見附錄A。試驗分組應(yīng)遵循隨機(jī)和局部控制的原則。
4.2.2.2 附錄A中沒有列出的其他動物品種，長期有效性評價試驗應(yīng)參照生理和生產(chǎn)階段相似物種的要求進(jìn)行。
4.2.2.3 如果受試物僅適用于動物的特定生長階段并且短于附錄A中規(guī)定的試驗期，試驗時間應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整，但不得少于28天，而且應(yīng)考察相關(guān)的特異性指標(biāo)。
4.2.2.4 長期有效性評價試驗的必測指標(biāo)包括：試驗開始和結(jié)束體重、飼料采食量、死亡率和發(fā)病率。
其他指標(biāo)根據(jù)動物品種和受試物的特殊功效確定。如果需要測定產(chǎn)奶或產(chǎn)蛋性能，則應(yīng)分別提供有關(guān)奶成分和蛋品質(zhì)的數(shù)據(jù)。
4.2.2.5 在評價受試物對養(yǎng)殖產(chǎn)品質(zhì)量的影響時，長期有效性評價試驗也可用來采集相關(guān)樣品。
4.3觀察與檢測
4.3.1應(yīng)根據(jù)受試物的作用特點和用途，增加相應(yīng)的特異性觀測指標(biāo)和敏感性功能指標(biāo)。
4.3.2應(yīng)按照國家標(biāo)準(zhǔn)、國際認(rèn)可方法或經(jīng)確證的文獻(xiàn)報道方法確定檢測方法。如果采用文獻(xiàn)報道方法或新建方法，應(yīng)提供方法確證的數(shù)據(jù)資料，說明其合理性。
4.4 數(shù)據(jù)記錄
4.4.1在試驗實施過程中，試驗方案所涉及的內(nèi)容均應(yīng)逐一記錄。數(shù)據(jù)記錄應(yīng)真實、準(zhǔn)確、完整、規(guī)范、清晰，并妥善保管。
4.4.2數(shù)據(jù)的有效位數(shù)以所用儀器的精度為準(zhǔn)，采用國家法定計量單位和國家推薦使用的單位。
4.5 統(tǒng)計分析
4.5.1以重復(fù)為單位，根據(jù)不同的試驗設(shè)計采用相應(yīng)的統(tǒng)計分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
4.5.2統(tǒng)計顯著性差異水平至少應(yīng)達(dá)到P<0.05。
5試驗報告
5.1試驗報告應(yīng)提供試驗獲取的所有數(shù)據(jù)，包括所有試驗動物和試驗重復(fù)。統(tǒng)計分析中未采用的數(shù)據(jù)或由于數(shù)據(jù)缺乏、數(shù)據(jù)丟失而無法評價的情況也應(yīng)報告，并說明在各組別中的分布情況。
5.2每個靶動物有效性評價試驗必須單獨形成最終報告。每個試驗最終報告中應(yīng)包含試驗概述（見附錄B）和報告正文。
5.3試驗報告正文至少應(yīng)包括：
A、試驗名稱；
B、摘要；
C、試驗?zāi)康模?br> D、受試物；
E、試驗時間和地點；
F、試驗材料和方法；
G、結(jié)果與討論；
H、結(jié)論；
I、原始數(shù)據(jù)及相關(guān)的圖表和照片；統(tǒng)計分析中未采用的數(shù)據(jù)或由于數(shù)據(jù)缺乏、數(shù)據(jù)丟失而無法評價的情況應(yīng)具體說明；
J、參考文獻(xiàn)；
K、試驗機(jī)構(gòu)和操作人員，包括試驗機(jī)構(gòu)的名稱，試驗操作人員、試驗負(fù)責(zé)人和報告簽發(fā)人的簽名，報告簽發(fā)時間，加蓋簽發(fā)機(jī)構(gòu)的單位公章或?qū)ｉT的分析測試章；委托檢測的數(shù)據(jù)應(yīng)提供檢測機(jī)構(gòu)出具的檢測報告。
5.4 應(yīng)對試驗報告每頁進(jìn)行編碼，格式為“第 頁，共 頁”， 并加蓋試驗機(jī)構(gòu)騎縫章，確保報告的完整性。
6 資料存檔
最終報告、原始記錄、圖表和照片、試驗方案、受試物樣品及其檢測報告等原始資料應(yīng)存檔備查，保存時間一般不得少于5年，作為產(chǎn)品申報的，保存時間至少為10年。






附錄A：試驗期和動物數(shù)量
表1. 豬
類 別 試驗階段*（體重或日齡） 最短試驗期 最少試驗重復(fù)
和動物數(shù)量
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
哺乳仔豬 出生 21~42 6~11 14天 每個處理6個有效重復(fù)，每個重復(fù)6頭，性別比例相同
斷奶仔豬 21~42日齡 120 35 28天
哺乳和
斷奶仔豬 出生 120 35 42天
生長
育肥豬 ≤35 kg 120~250（或根據(jù)當(dāng)?shù)亓?xí)慣） 80~150 （或根據(jù)當(dāng)?shù)亓?xí)慣直到屠宰體重） 70天
繁殖母豬 初次受精 受精至斷奶，至少兩個繁殖周期 每個處理20個有效重復(fù)，每個重復(fù)1頭
泌乳母豬 分娩前兩周至斷奶
注：
* 試驗階段：指試驗用動物所處的生長階段，最短試驗期應(yīng)處于所對應(yīng)的試驗階段。
表2. 家禽
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期 最少試驗重復(fù)和動物數(shù)量
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
肉仔雞 出殼 35天 1.6~2.4 35天 每個處理6個有效重復(fù)，每個重復(fù)15只，性別比例相同
蛋用雛雞 出殼 16(20)周齡 112天*
產(chǎn)蛋雞 16~21周齡 13（18）月齡 168天
肉鴨 出殼 35天 35天
產(chǎn)蛋鴨 25周齡 50周齡 168天
育肥用火雞 出殼 母：4(20)周齡
公：16(24)周齡 母：7~10
公：12~20 84天
種用火雞 開始產(chǎn)蛋（30周齡） 60周齡 6個月
后備
種用火雞 出殼 30周齡 母：15
公：30 全程**
注：
* 僅當(dāng)肉仔雞的有效性評價試驗數(shù)據(jù)無法提供時進(jìn)行
** 僅當(dāng)育肥用火雞的有效性評價試驗數(shù)據(jù)無法提供時進(jìn)行
表3. 牛（包括水牛）
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期 最少試驗重復(fù)和動物數(shù)量
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
犢牛 出生或者60~80 kg 4月齡 145 56天 每個處理15個有效重復(fù)，每個重復(fù)1頭，性別比例相同
生產(chǎn)小牛肉的肉用犢牛 出生 6月齡 180（250）或直到屠宰體重 84天
育肥牛 瘤胃發(fā)育完全（至少完全斷奶） 10~36月齡 350~700 126天
泌乳奶牛 84天*
繁殖母牛 初次受精 受精至斷奶，至少兩個繁殖周期**
注：
* 需報告整個泌乳期情況
** 僅當(dāng)需要測定繁殖指標(biāo)時進(jìn)行
表4. 綿羊
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期 最少試驗重復(fù)和動物數(shù)量
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
育成羔羊 出生 3月齡 15~20 56天 每個處理15個有效重復(fù)，每個重復(fù)1只，性別比例相同
育肥羔羊 出生 6月齡或以上 40或直到屠宰體重 56天
泌乳
奶綿羊 49天*
繁殖綿羊 初次受精 受精至斷奶，至少兩個繁殖周期**
育肥綿羊 6月齡 42天
注：
* 需報告整個泌乳期情況
** 僅當(dāng)需要測定繁殖指標(biāo)時進(jìn)行

表5. 山羊
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期 最少試驗重復(fù)和動物數(shù)量
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
育成羔羊 出生 3月齡 15~20 56天 每個處理15個有效重復(fù)，每個重復(fù)1只，性別比例相同
育肥羔羊 出生 6月齡或以上 40或直到屠宰體重 56天
泌乳
奶山羊 84天*
繁殖山羊 初次受精 受精至斷奶，至少兩個繁殖周期**
育肥山羊 6月齡 42天
注：
* 需報告整個泌乳期情況
**僅當(dāng)需要測定繁殖指標(biāo)時進(jìn)行
表6. 家兔
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期 最少試驗重復(fù)和動物數(shù)量
起始 結(jié)束日齡
哺乳和斷奶兔 出生后一周 56天 每個處理6個有效重復(fù)，每個重復(fù)4只，性別比例相同
育肥兔 斷奶后 8~11周 42天
繁殖母兔 從受精開始 受精至斷奶，至少為兩個繁殖周期*
泌乳母兔 第一次受精 分娩前2周至斷奶
注：
* 僅當(dāng)需要測定繁殖指標(biāo)時進(jìn)行

附錄B：試驗概述表
試驗編號： 第1頁，共 頁
受
試
物 受試物通用名稱： 有效成分：
有效成分標(biāo)示值： 有效成分實測值：
產(chǎn)品類別： 外觀性狀：
生產(chǎn)單位： 生產(chǎn)日期及批號：
樣品數(shù)量及包裝規(guī)格： 保質(zhì)期：
收(抽)樣日期： 送(抽)樣人：
抽樣地點：（適用時） 抽樣基數(shù)：（適用時）
試驗
動物 試驗動物品種：
性別： 生理階段：
起始日齡： 起始體重：
健康狀況：
動物來源和種群規(guī)模： 飼喂方式：
飼養(yǎng)條件：
時間
與
場所 試驗起始時間： 試驗持續(xù)時間：
試驗場所：
設(shè)計
與
分組 分組設(shè)計方法：
試驗組數(shù)量(含對照組)： 每組重復(fù)數(shù)：
每個重復(fù)動物數(shù)： 試驗動物總數(shù)：
日糧中有效成分添加量 日糧中有效成分含量
試驗組1
試驗組2
試驗組3
……
對照物質(zhì)名稱：
(適用時) 對照物質(zhì)在日糧中添加量 對照物質(zhì)在日糧中含量

試驗
日糧 日糧組成(營養(yǎng)素和能值)
計算值 實測值
成分1
成分2
成分3
……
日糧形態(tài) 粉料□ 顆粒□ 膨化□ 其他
檢測項目
和
實施時間
治療和預(yù)防措施
(原因、時間、種類、持續(xù)時間等)
數(shù)據(jù)統(tǒng)計
分析方法
突發(fā)狀況的處理、不良后果發(fā)生的時間及發(fā)生范圍：
結(jié)論
原始
記錄
保管
備注

試驗人員：



項目負(fù)責(zé)人：



報告簽發(fā)人及簽發(fā)時間：





附件2：

飼料和飼料添加劑畜禽靶動物耐受性評價試驗指南（試行）


1適用范圍
1.1本指南規(guī)定了飼料原料和飼料添加劑畜禽靶動物耐受性評價試驗的基本原則、試驗方案、試驗方法和試驗報告等要求。
1.2本指南適用于為新飼料和飼料添加劑、進(jìn)口飼料和飼料添加劑申報以及已經(jīng)批準(zhǔn)使用的飼料和飼料添加劑再評價而進(jìn)行的畜禽靶動物耐受性評價試驗。
1.3 畜禽飼料產(chǎn)品的靶動物體內(nèi)耐受性評價試驗可參照本指南的要求進(jìn)行。
2基本原則
2.1靶動物耐受性評價試驗的目的是為飼料和飼料添加劑（以下簡稱為“受試物”）對靶動物的短期毒性提供有限評價；當(dāng)受試物使用劑量超出推薦用量時，也可用來確立受試物的安全范圍。
2.2應(yīng)根據(jù)中國的養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)實際開展靶動物耐受性評價試驗，以保證評價結(jié)果的科學(xué)性、客觀性。
2.3靶動物耐受性評價試驗應(yīng)對受試物所適用的每一種靶動物分別進(jìn)行評價， 本指南4.3以及其他另有規(guī)定的特殊情況除外。
2.4 靶動物耐受性評價試驗應(yīng)由具備一定專業(yè)知識和試驗技能的專業(yè)人員在適宜的試驗場所、使用適宜的設(shè)備設(shè)施、按照規(guī)范的操作程序進(jìn)行，并且由試驗機(jī)構(gòu)指定的負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)。用于產(chǎn)品申報的，評價機(jī)構(gòu)和人員的要求另行規(guī)定。
2.5試驗動物應(yīng)健康并且具有相似的遺傳背景；飼養(yǎng)環(huán)境不應(yīng)對試驗結(jié)果造成影響；受試物和試驗日糧不得受到污染。
2.6在符合靶動物耐受性評價試驗相關(guān)要求的前提下，靶動物耐受性評價試驗可與靶動物有效性評價試驗合并進(jìn)行。
2.7 靶動物耐受性評價試驗應(yīng)充分考慮實驗動物毒理學(xué)研究的結(jié)果。
3 試驗方案
試驗開始前，應(yīng)根據(jù)受試物和靶動物的特點，對試驗進(jìn)行系統(tǒng)設(shè)計，形成試驗方案。試驗方案應(yīng)包括試驗?zāi)康摹⒃囼灧椒ā�儀器設(shè)備、詳細(xì)的動物品種和類別、動物數(shù)量、飼養(yǎng)和飼喂條件等，并由試驗負(fù)責(zé)人簽字確認(rèn)。具體要求如下：
3.1試驗動物：品種、年齡、性別、生理階段和一般健康狀況；
3.2試驗條件：動物來源和種群規(guī)模、飼養(yǎng)條件、飼喂方式；預(yù)飼期的條件要求；
3.3試驗分組：試驗組和對照組數(shù)量、每組重復(fù)數(shù)和每個重復(fù)的動物數(shù)（必須滿足統(tǒng)計學(xué)要求）、統(tǒng)計方法；
3.4試驗日糧：描述日糧的加工方法、日糧組成及相關(guān)的營養(yǎng)成分含量（實測值）和能量水平；注意根據(jù)受試物特點和使用方法配制日糧，使用的原料應(yīng)符合我國法規(guī)和相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，各試驗處理組試驗因子以外的其他因素（如：料型、粒度、加工工藝等）應(yīng)一致；
3.5受試物的測定：受試物及其有效成分的通用名稱、生產(chǎn)廠家、規(guī)格、生產(chǎn)批號、有效成分含量的測試方法及測試結(jié)果、測試機(jī)構(gòu)，受試物有效成分在試驗日糧中的含量；
3.6觀測項目和時間：檢測和觀察項目名稱、實施和持續(xù)的確切時間；
3.7疾病治療和預(yù)防措施：不應(yīng)干擾受試物的作用模式并逐一記錄；
3.8突發(fā)狀況處理：動物個體和各試驗組發(fā)生的所有非預(yù)期的突發(fā)狀況，都應(yīng)記錄其發(fā)生的時間和范圍。
4.試驗方法
4.1受試物
4.1.1對于申請產(chǎn)品審定或登記的受試物，應(yīng)與擬生產(chǎn)（或擬進(jìn)口）的產(chǎn)品完全一致。產(chǎn)品應(yīng)由申報單位自行研制并在中試車間或生產(chǎn)線生產(chǎn)，同時提供產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和使用說明。
4.1.2試驗機(jī)構(gòu)應(yīng)將受試物樣品送國家或農(nóng)業(yè)部認(rèn)可的質(zhì)檢機(jī)構(gòu)對其有效成分的含量進(jìn)行實際測定。
4.2劑量與分組
4.2.1試驗分組：靶動物耐受性評價試驗至少要包括三個組，即對照組、有效劑量組、多倍劑量組。
4.2.2試驗劑量
對照組通常不應(yīng)含有受試物，但是，對于某些動物機(jī)體的必需營養(yǎng)素（如氨基酸、維生素、微量元素等），可以添加，但添加量應(yīng)維持在最低必需水平。
一般情況下，有效劑量組應(yīng)該選用最高限量。如果沒有最高限量，應(yīng)選用最高推薦劑量。如果沒有最高推薦量，應(yīng)根據(jù)受試物的自身特性，選擇最低推薦劑量的2-5倍作為有效劑量。
多倍劑量組一般選用上述有效劑量的10倍。
如果受試物的耐受劑量低于有效劑量的10倍，耐受性評價試驗應(yīng)能通過尸檢、組織病理學(xué)以及其他適宜的試驗方法提出反映受試物毒性的特異性指標(biāo)，并計算出受試物的安全系數(shù)。
4.2.3試驗重復(fù)數(shù)：各試驗組和對照組的試驗重復(fù)數(shù)（或動物數(shù)）必須滿足數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析的要求。一般情況下，每組重復(fù)數(shù)不能少于6個，其中豬、羊、牛等家畜1個動物即可為1個重復(fù)，而小動物（如家禽、兔等）則要求每個重復(fù)的動物數(shù)不能少于10只。性別比例應(yīng)相同。
4.3試驗期
4.3.1豬：哺乳仔豬的試驗應(yīng)在出生14天之后至斷奶前進(jìn)行，生長育肥豬試驗開始體重應(yīng)不大于35 kg。如果哺乳仔豬和斷奶仔豬均需要進(jìn)行耐受性評價試驗，采用一個組合試驗即可，試驗期為斷奶前14天到斷奶后28天。如果已進(jìn)行了斷奶仔豬的耐受性評價試驗，則不必再進(jìn)行生長育肥豬的耐受性評價試驗。
4.3.2家禽：肉仔雞、蛋用雛雞和育肥用火雞的試驗一般選用1日齡雛禽。肉仔雞獲得的靶動物耐受性評價試驗數(shù)據(jù)可以外推至蛋用和種用雛雞，肉用火雞的數(shù)據(jù)也可外推至蛋用和種用火雞。產(chǎn)蛋家禽的試驗一般選擇在前1/3產(chǎn)蛋期進(jìn)行。
4.3.3牛：生產(chǎn)小牛肉的肉用犢牛的試驗應(yīng)選用體重不超過70 kg的犢牛。如果犢牛和育肥牛均需要進(jìn)行靶動物耐受性評價試驗，開展一個組合試驗即可，每個階段各28天。
4.3.4家兔：如果哺乳期和斷奶期的家兔都需進(jìn)行耐受性評價試驗，試驗應(yīng)自仔兔出生后1周開始，試驗時間不少于49天，并且母兔應(yīng)與仔兔一同飼養(yǎng)直至斷奶。
4.3.5其他
4.3.5.1靶動物耐受性評價試驗需要的最短試驗期取決于適用動物的種類和生長階段，具體要求見附錄A。對于附錄A中未列出的動物，生長期動物的試驗期至少為28天，成年動物至少為42天。
4.3.5.2如果受試物僅適用于動物的特定生長階段并且短于附錄A中規(guī)定的試驗期，試驗時間應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整，但不得少于28天，而且應(yīng)考察相關(guān)的特異性指標(biāo)（如：若在妊娠母豬上使用，應(yīng)考察產(chǎn)活仔數(shù)；若在泌乳母豬上使用，則應(yīng)考察斷奶仔豬的體重和斷奶成活率等）。
4.4觀察與檢測
4.4.1臨床觀察
試驗期內(nèi)應(yīng)每天觀察試驗動物臨床表現(xiàn)、采食和飲水情況、生長情況以及相關(guān)動物產(chǎn)品的產(chǎn)量和特性。也應(yīng)詳細(xì)觀察和記錄不良反應(yīng)。對試驗中出現(xiàn)的不明原因的死亡應(yīng)進(jìn)行尸檢，如果可能，最好進(jìn)行組織學(xué)分析。
4.4.2血液學(xué)檢測
試驗開始和試驗結(jié)束（必要時增加試驗中期）時每組隨機(jī)抽檢一定數(shù)量的動物，性別比例適當(dāng)，分別采集血樣進(jìn)行血液常規(guī)、生化指標(biāo)及其他與受試物相關(guān)的各種生理參數(shù)的檢測。
血液常規(guī)指標(biāo)主要包括白細(xì)胞計數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計數(shù)（PLT）等指標(biāo)；生化指標(biāo)主要指谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TPRO）、白蛋白（ALB）、尿素氮（UN）、肌酐（CRE）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBILI）等指標(biāo)。
4.4.3組織病理學(xué)檢查
4.4.3.1尸體解剖學(xué)檢查：試驗結(jié)束時，各組屠宰一定數(shù)量的試驗動物(性別比例適當(dāng))，進(jìn)行系統(tǒng)尸體解剖學(xué)檢查，為進(jìn)一步的組織學(xué)檢查提供依據(jù)。
4.4.3.2臟器系數(shù)測定：試驗結(jié)束時，各組隨機(jī)屠宰一定數(shù)量動物(性別比例適當(dāng))，剖檢取心、肝、脾、肺、腎等臟器稱重，并計算各器官與體重的比值。
4.4.3.3組織病理學(xué)檢查：試驗結(jié)束時，對多倍劑量組及尸檢異常動物的主要器官進(jìn)行系統(tǒng)的組織病理學(xué)檢查，詳細(xì)檢查的器官和組織包括：心、肝、脾、肺、腎、胸腺、胰腺、胃、十二指腸、回腸、直腸、淋巴結(jié)、骨髓等組織。
4.4.4其他特異性觀測指標(biāo)
根據(jù)受試物的作用特點和用途，增加相應(yīng)的特異性觀測指標(biāo)和敏感性功能指標(biāo)。
4.5數(shù)據(jù)記錄
4.5.1在試驗實施過程中，試驗方案所涉及的內(nèi)容均應(yīng)逐一記錄。數(shù)據(jù)記錄應(yīng)真實、準(zhǔn)確、完整、規(guī)范、清晰，并妥善保管。
4.5.2數(shù)據(jù)的有效位數(shù)以所用儀器的精度為準(zhǔn)，采用國家法定計量單位和國家推薦使用的單位。
4.6統(tǒng)計分析
4.6.1以重復(fù)為單位，根據(jù)不同的試驗設(shè)計采用相應(yīng)的統(tǒng)計分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
4.6.2統(tǒng)計顯著性差異水平至少應(yīng)達(dá)到P<0.05。
5試驗報告
5.1試驗報告應(yīng)提供試驗獲取的所有數(shù)據(jù)，包括所有試驗動物和試驗重復(fù)。未納入統(tǒng)計分析的數(shù)據(jù)或由于數(shù)據(jù)缺乏、數(shù)據(jù)丟失而無法評價的情況也應(yīng)報告，并說明在各組別中的分布情況。
5.2每個靶動物耐受性評價試驗必須單獨形成最終報告。每個試驗最終報告中應(yīng)包含試驗概述（見附錄B）和報告正文。
5.3試驗報告正文至少應(yīng)包括：
A、試驗名稱；
B、摘要；
C、試驗?zāi)康模?br> D、受試物；
E、試驗時間和地點；
F、試驗材料和方法；
G、結(jié)果與討論；
H、結(jié)論；
I、原始數(shù)據(jù)及相關(guān)的圖表和照片；未納入統(tǒng)計分析的數(shù)據(jù)或由于數(shù)據(jù)缺乏、數(shù)據(jù)丟失而無法評價的情況應(yīng)具體說明；
J、參考文獻(xiàn)；
K、試驗機(jī)構(gòu)和操作人員，包括試驗機(jī)構(gòu)的名稱，試驗操作人員、試驗負(fù)責(zé)人和報告簽發(fā)人的簽名，報告簽發(fā)時間，加蓋簽發(fā)機(jī)構(gòu)的單位公章或?qū)ｉT的分析測試章；委托檢測的數(shù)據(jù)應(yīng)提供檢測機(jī)構(gòu)出具的檢測報告。
5.4 應(yīng)對試驗報告每頁進(jìn)行編碼，格式為“第 頁，共 頁”， 并加蓋騎縫章，確保報告的完整性。
6資料存檔
最終報告、原始記錄、圖表和照片、試驗方案、受試物樣品及其檢測報告等原始資料應(yīng)存檔備查，保存時間一般不得少于5年，作為產(chǎn)品申報的，保存時間至少為10年。

附錄A：試驗期
表1. 豬
類 別 試驗階段*（體重或日齡） 最短試驗期
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
哺乳仔豬 14日齡 21~42 6~11 14天
斷奶仔豬 21~42日齡 120 35 28天
哺乳和
斷奶仔豬 14日齡 120 35 42天
生長
育肥豬 ≤35 kg 120~250（或根據(jù)當(dāng)?shù)亓?xí)慣） 80~150 （或根據(jù)當(dāng)?shù)亓?xí)慣） 42天**
繁殖母豬 初次受精 受精至斷奶，至少一個繁殖周期
泌乳母豬 分娩前兩周至斷奶
注：
* 試驗階段：指試驗用動物所處的生長階段，最短試驗期應(yīng)處于所對應(yīng)的試驗階段
**如果已有斷奶仔豬的耐受性評價試驗數(shù)據(jù)，則不必再進(jìn)行生長育肥豬的耐受性評價試驗
表2. 家禽
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
肉仔雞 出殼 35天 1.6~2.4 35天
蛋用雛雞 出殼 16(20)周齡 35天*
產(chǎn)蛋雞 16~21周齡 13（18）月齡 56天**
育肥用火雞 出殼 母：14(20)周齡
公：16(24)周齡 母：7~10
公：12~20 42天
種用火雞 開始產(chǎn)蛋（30周齡） 60周齡 56天
后備種用火雞 出殼 30周齡 母：15
公：30 42天***
注：
* 僅當(dāng)肉仔雞的耐受性評價試驗數(shù)據(jù)無法提供時進(jìn)行
**最好在開產(chǎn)后的前1/3產(chǎn)蛋期進(jìn)行
***僅當(dāng)育肥用火雞的耐受性評價試驗數(shù)據(jù)無法提供時進(jìn)行
表3. 牛（包括水牛）
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
犢牛 出生或60-80 kg 4月齡 145 42天
生產(chǎn)小牛肉的肉用犢牛 <70 kg 6月齡 180（250） 28天
育肥牛 瘤胃發(fā)育完全（至少完全斷奶） 10~36月齡 350~700 42天
泌乳奶牛 56天
繁殖母牛 初次受精 受精至斷奶，至少一個繁殖周期
表4. 綿羊
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
育成羔羊 出生 3月齡 15~20 28天
育肥羔羊 出生 6月齡或以上 40 28天
泌乳奶綿羊 42天
繁殖綿羊 初次受精 受精至斷奶，至少一個繁殖周期
表5. 山羊
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期
起始 結(jié)束日齡 結(jié)束體重（kg）
育成羔羊 出生 3月齡 15~20 28天
育肥羔羊 出生 6月齡或以上 40 28天
泌乳奶山羊 42天
繁殖山羊 初次受精 受精至斷奶，至少一個繁殖周期
表6. 家兔
類 別 試驗階段（體重或日齡） 最短試驗期
開始 結(jié)束日齡
哺乳和斷奶兔 出生后一周 49天
育肥兔 斷奶后 8~11周 28天
繁殖母兔 從受精開始 受精至斷奶，至少一個繁殖周期
泌乳母兔 第一次受精 分娩前兩周至斷奶

附錄B：試驗概述表
試驗編號： 第1頁，共 頁
受
試
物 受試物通用名稱： 有效成分：
有效成分標(biāo)示值： 有效成分實測值：
產(chǎn)品類別： 外觀性狀：
生產(chǎn)單位： 生產(chǎn)日期及批號：
樣品數(shù)量及包裝規(guī)格： 保質(zhì)期：
收(抽)樣日期： 送(抽)樣人：
抽樣地點：（適用時） 抽樣基數(shù)：（適用時）
試驗
動物 試驗動物品種：
性別： 生理階段：
起始日齡： 起始體重：
健康狀況：
動物來源和種群規(guī)模： 飼喂方式：
飼養(yǎng)條件：
時間
與
場所 試驗起始時間： 試驗持續(xù)時間：
試驗場所：
設(shè)計
與
分組 分組設(shè)計方法：
試驗組數(shù)量(含對照組)： 每組重復(fù)數(shù)：
每個重復(fù)動物數(shù)： 試驗動物總數(shù)：
日糧中有效成分添加量 日糧中有效成分含量
試驗組1
試驗組2
試驗組3
……
對照物質(zhì)名稱：
(適用時) 對照物質(zhì)在日糧中添加量 對照物質(zhì)在日糧中含量

試驗
日糧 日糧組成(營養(yǎng)素和能值)
計算值 實測值
成分1
成分2
成分3
……
日糧形態(tài) 粉料□ 顆粒□ 膨化□ 其他
檢測項目
和
實施時間
治療和預(yù)防措施
(原因、時間、種類、持續(xù)時間等)
數(shù)據(jù)統(tǒng)計
分析方法
突發(fā)狀況的處理、不良后果發(fā)生的時間及發(fā)生范圍：
結(jié)論
原始
記錄
保管
備注

試驗人員：



項目負(fù)責(zé)人：



報告簽發(fā)人及簽發(fā)時間：